Optimierte Leistung für Oligonukleotide

UHPLC-Leistung mit Drücken, die jedes HPLC-System bewältigen kann.

Sichere Investition

Direkter Methodenübertrag vom Marktführer zu unseren kosteneffizienten Säulen

Trennmodus

IP-RP

Druck

Niedriger Rückdruck selbst bei hohen Durchflussraten

Leistung

UHPLC-Leistung mit klassischem HPLC-Gerät

Beste Alternative

Attraktiver Preis & lange Haltbarkeit

Spitzenleistung in Analytik

Perfekt für die Identifizierung, Quantifizierung und Qualitätskontrolle (QC) von Oligonukleotiden

Ion-Paarung – Reversed Phase Modus

KNAUER Sepapure® Oligonukleotide-Säulen

Die Ion-Paar-Reversed-Phase (IP-RP) Chromatographie hat sich als robuste Technik zur Analyse hochgeladener Biomoleküle wie Oligonukleotide etabliert. Diese Moleküle spielen eine zentrale Rolle sowohl in der Forschung als auch in therapeutischen Anwendungen, und ihre Bedeutung in der modernen Medizin wächst weiterhin.

Doch je komplexer die Oligonukleotidstrukturen werden, desto wichtiger ist es, Shortmers und eng eluierende Verunreinigungen genau zu trennen.

IP‑RP stellt hohe Anforderungen an die Säulenleistung – insbesondere in Bezug auf die pH-Stabilität und die Verträglichkeit mit Ionenaustauschreagenzien. Die Sepapure® oliGO-Säulen sind ideal geeignet, um diese Anforderungen zu erfüllen. Sie bieten eine leistungsstarke, kosteneffiziente Lösung, die einen reibungslosen Methodenübergang ermöglicht und durchgehend zuverlässige Ergebnisse liefert, ohne die analytische Qualität zu beeinträchtigen.

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Vorteile der Sepapure oliGO-Säule

Optimiert, nicht nur in Bezug auf die alternierende Chemie

Vorteile von niedrigem Rückdruck

Höher, schneller, besser ... Diese Eigenschaften werden oft mit hohem Rückdruck in der HPLC in Verbindung gebracht. Die hervorragende Leistung einer UHPLC-Säule ist jedoch nicht das Ergebnis ihres hohen Rückdrucks, sondern vielmehr der größeren Interaktionsoberfläche kleinerer Partikel. Der hohe Rückdruck ist nicht mehr als eine unangenehme Nebenwirkung der kleinen Partikel. Aufgrund des hohen Rückdrucks treten Verstopfungen oder Abnutzungserscheinungen viel schneller irgendwo im Instrument und in der Trennsäule auf.

Die Sepapure oliGO-Säulen erzeugen trotz ihrer kleinen Partikelgröße von 3 µm nur einen niedrigen Rückdruck. Dies schützt das Material und ermöglicht eine hervorragende UHPLC-Analyse, selbst mit einem kostengünstigen HPLC-System. Der niedrige Rückdruck bedeutet auch weniger Druck auf die empfindliche 3D-Struktur der sensiblen Oligonukleotidstränge, was Aggregation und Clusterbildung reduziert. Dies führt wiederum zu einer besseren Auflösung von Nebenprodukten mit ähnlicher Ladung und Struktur.

pH-Stabilität

Der pH-Wert ist ein kritischer Faktor in der ionenpaarenden reversen Chromatografie. Da das Zusammenspiel von hydrophoben und ionischen Wechselwirkungen der Oligonukleotidketten hauptsächlich auf der negativen Ladung des phosphorylierten Desoxyribose-Rückgrats beruht, ist der richtige pH-Wert der Schlüssel zu einer erfolgreichen Trennung.

Welches Ionpaar-Reagenz am besten verwendet wird, hängt auch von der Kettenlänge der Oligonukleotide ab. Der ideale pH-Wert liegt zwischen 7,0 und 9,5, abhängig davon, welches Ionpaar-Reagenz verwendet wird. Die Sepapure oliGO-Säulen wurden speziell für diesen pH-Bereich optimiert und erreichen hier ihre Spitzenleistung.

Warum nicht inerte Hardware?

Es ist gängige Praxis geworden, Säulen mit inertisiertem Material für Biomoleküle anzubieten. Einige Biomoleküle, insbesondere Proteine, haben gezeigt, dass sie mit Metallionen interagieren und ihre funktionelle Konformation durch die Wechselwirkung mit Metalloberflächen verlieren können. Wir haben umfangreiche Tests zusammen mit Experten für Oligonukleotidsynthese durchgeführt und konnten keinen Einfluss auf die Peakform oder die Trennung von Oligonukleotiden und deren Verunreinigungen feststellen.

Darüber hinaus ist die Konformation, d.h. die 3D-Ausrichtung im Raum, in der Oligonukleotidanalyse nicht entscheidend. Da KNAUER großen Wert auf Kundenorientierung legt, haben wir uns daher entschieden, eine kostengünstige, nicht-inertiale Alternative zu den auf dem Markt typischerweise angebotenen Oligonukleotid-Säulen anzubieten.

IP-RP für Analytik und Anionenaustauscher zur Reinigung

Die IP-RP-Chromatografie hat sich als optimal für die Analyse von Oligonukleotiden erwiesen. Die Kombination aus hydrophoben Wechselwirkungen mit den Alkylketten der stationären Phase und den ionischen Wechselwirkungen mit den Ionenaustauschreagenzien ist ideal, um eine maximale empfindliche Auflösung im Chromatogramm zu erreichen. Allerdings geht die Selektivität dieser Methode mit einer Verringerung der Ladefähigkeit der Säule einher.

Dies bedeutet, dass für die Reinigung der gleichen Menge Oligonukleotide im Vergleich zur Anionenaustauschchromatographie deutlich größere Säulenvolumina erforderlich sind. Dies ist auch mit einem erheblich höheren Lösungsmittelverbrauch verbunden. Daher wird die wässrige Anionenaustauschchromatografie (IEX) weiterhin für die Reinigung von Oligonukleotiden empfohlen. Wir empfehlen auch unser Anwendungsnotiz VBS0082: Großmaßstäbliche Reinigung von Oligonukleotiden mit Ionenaustauschchromatografie. Dennoch gibt es in der semi-präparativen HPLC einen Übergangsbereich, in dem die höhere Auflösung der Sepapure oliGO-Säulen Vorteile bei der Reinigung bietet.

KNAUER Column Selection Guide
HPLC- und UHPLC-Säulen von KNAUER – bekannt für hohe Qualität und Leistung. Zuverlässig und robust – mehr als 45 Jahre Know-how in Trennsäulen.

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