Das flexibelste FPLC System zur Proteinreinigung

Affinitäts­­chromatographie (AC)

Die Affinitäts-Chromatografie ist ein Mehrschritt-Verfahren (Binden, Waschen, Eluieren), das sich durch eine spezifische Bindung der Zielmoleküle an das Säulenmaterial auszeichnet.

Daher muss der Ligand der stationären Phase auf die Zielmoleküle abgestimmt sein. In einem Waschschritt werden alle nicht-spezifisch gebundenen Anteile der Probe entfernt. </p><p>Der darauffolgende Elutionsschritt setzt die Zielmoleküle frei.

Ionenaustausch­­chromatographie (IEX)

Die Ionenaustausch-Chromatografie separiert Moleküle basierend auf ihrer Gesamtladung.

Es handelt sich um ein kompetitives Verfahren, bei dem zunächst Zielmoleküle und alle gleichsinnig geladenen Moleküle aus der Probe relativ unspezifisch an die Phase „binden“ und dann graduell eluiert werden (2 Schritte). Für Zielmoleküle mit einer positiven Gesamtladung wird beispielsweise ein Kationenaustauscher eingesetzt.        

Die stationäre Phase selbst ist entgegengesetzt, also negativ geladen. Die anfängliche Bindung an die stationäre Phase findet unter Bedingungen niedriger Ionenstärke statt, d.h. die mobile Phase mit der Probe weist eine geringen Elektrolytgehalt auf. Die Elution wird durch einen Salzgradienten erreicht. Durch Erhöhen der Salzkonzentration eluieren Proteine mit einer schwachen Ladung zuerst, während bei höheren Salzkonzentrationen Proteine mit einer starken Ladung später eluieren.
 

Hydrophobe Interaktions­chromatographie (HIC)

Die Trennung wird basierend auf hydrophober Wechselwirkung und Gradientenelution durchgeführt.

Multi-Methoden System

Bei der Protein Aufreinigung werden meist verschiedene Aufreinigungsmethoden miteinander kombiniert. Ein Multi-Methoden System ist in der Lage die Ansprüche der verschiedenen Methoden zu berücksichtigen und bietet somit das perfekte System für komplexe Aufreinigungsstrategien. 

Injektionsventile

In der FPLC Aufreinigung sind wechselnde Probenmengen für unterschiedliche Methoden typisch und können zwischen Mikroliter bis zu Liter variieren. Um das System an die unterschiedlichen Mengen anzupassen wird oft zwischen der Injektion durch eine Probenpumpe und Probenschleifen gewechselt. Das multifunktionelle Injektionsventil ist dafür hervorragend geeignet.

Säulenauswahlventil

Die FPLC Aufreinigung ist zumeist ein Prozess aus mehreren Aufreinigungsschritten. Jeder Schritt beinhaltet die Nutzung einer speziellen Säule. Um die Möglichkeit zu haben zwischen verschiedenen Säulen schnell und einfach zu wechseln eignet sich das Säulenauswahlventil.

Auslassventil

Ein Auslassventil Modul kann für die eigenständige Fraktionierung oder kombiniert mit einem Fraktionssammler verwendet werden. Neben der Fraktioniermöglichkeit, die das Ventil bietet, ermöglicht es außerdem die transformation eines standard Laborsystem in ein automatisiertes Two-Step Aufreinigungssystem.

                                             8er Auslassventil                                                  16er Auslassventil

Bis zu drei Ventile können in einer FPLC Modul Docking Station vereint werden. In dieser Docking Station können auch kleine Pumpen und Detektoren mit Ventilen kombiniert werde.